?生命不能承受之痛
有人说你是异草
其实是他们没见过奇花
你那与众不同的身姿
是天使调皮的漫画
你经历的万般苦难
是人类进化的代价
……
这是一首美丽的诗，但诗里描述的却是常人不能承受的痛苦——一种名为杜氏肌营养不良症的遗传病彻底地颠覆了他的人生。
“妈妈，你说这世界上真的会有天堂吗？”从5岁开始浩浩便常常问妈妈这个问题“有啊，天堂可好了，那里会有你想要的一切东西”浩浩是一名杜氏肌营养不良症罕见病患儿，妈妈试图用这样的回答打消浩浩对死亡的恐惧。
那么杜氏肌营养不良症到底有多可怕呢？
杜氏肌营养不良症杜氏肌营养不良症(DMD)，一种随着年龄增加全身肌肉渐进性损伤和萎缩运动功能减退的致死性X-伴性隐性遗传肌肉疾病，已被列入罕见病范围。它由一种与抗肌萎缩蛋白有关的基因突变引起，这些基因突变会影响抗肌萎缩蛋白的合成，进而影响肌肉的健康和功能。每个新生男婴中就有一个DMD患者，据上海一家公益组织机构调查患病率和新生儿出生率后估计，全国DMD患者应该在7万~8万左右。通常DMD患儿3岁~4岁开始步态异常、10岁~12岁逐渐丧失行走能力全身肌肉逐渐萎缩、20岁~30岁间死于心肺功能衰竭，目前尚无有效根治手段、支持疗法和康复治疗能延缓病情。
短短二三十年，多彩的生命画卷还没来得及完全展开就已落幕，在这一过程中，受煎熬的，不只是孩子，还有他们的父母——因为谁也不知道，最终的那一天会何时到来……
庆幸的是，随着科学技术的发展，利用多重连接依赖性探针扩增（MLPA）技术可以对DMD患者进行基因检测，这意味着，治愈DMD的希望正在向我们靠近。
MLPA技术
MLPA技术是一种被广泛应用的分子生物学技术，可对人类遗传疾病研究中的多种DNA序列进行拷贝数检测。该技术基于探针寡核苷酸的连接和PCR扩增，涵盖了多达50对可对目标基因座进行杂交的多重探针寡核苷酸。该方法已成功应用于外显子缺失和重复引起的疾病研究中，如杜氏肌营养不良症（DMD）和BRCA1/BRCA2基因分析。此外，MLPA技术的升级也可用于各种基因组序列的定量甲基化分析。
?MLPA的技术原理：
1.变性和杂交：设计一对左右探针（LPO和RPO）和目标基因互补结合
2.连接：通过连接酶连接杂交探针
3.扩增：通过荧光标记的PCR引物扩增连接探针
每对探针设计成扩增特定长度的产物，并且通过荧光标记末端，所有连接的探针可以在PCR反应中通过单个引物对扩增。正向PCR引物携带AppliedBiosystems?6-FAM?荧光标记，可在毛细管电泳(CE)仪上按照探针的分子大小进行检测和定量。
在很多疾病研究中，MLPA技术都扮演了重要的角色。为了帮助科研人员顺利进行检测，赛默飞一直在提供性能卓越的分析仪器，就像今年推出的新型Seqstudio基因分析仪，在MLPA检测应用方面，有着明显的优势。
新型SeqStudio基因分析仪
新的SeqStudio基因分析仪依托30年经验积累的AppliedBiosystems?毛细管电泳基因分析仪品牌。该基因分析仪通过对许多小型微生物基因组以及大型植物、哺乳动物和人类基因组进行图谱绘制和测序已经取得了重大的科学突破。
图1.SeqStudio基因分析仪和卡夹
我们的基因分析仪拥有两大标志性功能：Sanger测序和通过多色荧光标记和精确分子大小测定的DNA片段分析。该仪器的核心设计在于多功能卡夹，将四道毛细管、通用性聚合物、阳极缓冲液和聚合物传递系统集成到一个简单的卡夹中，具有易用性、稳定性、高效性等强大的性能，为用户获取数据提供了更高的灵活性和可控性。
?SeqStudio基因分析仪上进行MLPA检测拥有以下无与伦比的优势：
?通过MRC-Holland开发的多重连接依赖性探针扩增（MLPA?）Assay，新型AppliedBiosystems?SeqStudio?基因分析仪可生成高质量数据。
?SeqStudio基因分析仪可快速、高效地获取结果；每次可同时运行4份MLPA反应样品，并在45分钟内完成实验。
?连接网络功能允许CE平台上的MLPA数据文件自动上传到个人或共享空间帐户；以ThermoFisherCloud为例，可在任何接入互联网的位置立即查看数据文件。
?SeqStudio基因分析仪具有较高的检测动态范围，可实现MLPA探针扩增子的精准片段大小及准确峰高。
?生成的片段分析数据文件（.fsa）可以轻松导入Coffalyser.NetMLPA数据分析软件进行后续数据分析。
使用新型SeqStudio基因分析仪进行MLPA检测DMD基因中大片段重复
为了证明在人类基因组中可用于重复片段检测，我们分析了已知在DMD基因中携带外显子2-30的重复序列的先证者的DNA样品，并将其与正常参考DNA样品进行比较。
本实验使用SALSA?MLPA?probemixPDMD-1。图2A显示了包含MLPA峰值分布的注释电泳图，图2B为显示靶向DMD基因中重复区域的探针比率的对应比率图。在蓝色阈值线上方表示重复区域，并且由探针比率从1增加到1.5来表示，对应拷贝数从2增加到3。
图2.检测DMD基因中的主要重复区域。(A)携带重复（底部）和参考样品（顶部）的先证者的MLPAprobemixPDMD的峰值图谱。(B)重复携带基因的比例图，探针比例为~1.5表示拷贝数增加。
?结论
SeqStudio基因分析仪是AppliedBiosystems?系列毛细管电泳仪家族新成员，具有Sanger测序和片段分析功能。
在此，我们已经证明该平台可从MLPA检测反应生成可靠数据。仪器生成的主要片段分析数据文件(.fsa)可轻松导入到MLPA专用的Coffalyser.net软件中进行MLPA数据分析。
SeqStudio基因分析仪是一种经济实惠、易于使用、维护需求少的仪器，对于正进行或计划使用MlPA的实验室，或者任何正在进行其他基因疾病研究的基因片段和测序分析的遗传分析实验室，都是不可多得的利器。
赞赏
